ACHUCARRO-PHD Thesis;;ACHUCARRO-PHD Thesishttp://hdl.handle.net/10810/195102024-03-28T12:52:57Z2024-03-28T12:52:57ZThe role of purinergic receptor A1 in neurogenesis modulation from subventricular zoneBenito Muñoz, Mónicahttp://hdl.handle.net/10810/191652022-12-01T19:30:20Z2016-06-16T00:00:00ZThe role of purinergic receptor A1 in neurogenesis modulation from subventricular zone
Benito Muñoz, Mónica
La neurogénesis continúa en la edad adulta en regiones específicas del cerebro como la zona subgranular del hipocampo y la zona subventricular (SVZ) de los ventrículos laterales. Resultados previos de nuestro laboratorio demostraron que el ATP liberado tras la deprivación de oxígeno y glucosa inhibe la neurogénesis adulta. Por lo tanto, nuestro objetivo es determinar el papel de la adenosina, uno de los productos de la hidrólisis del ATP, en la modulación de la neurogénesis. Los resultados obtenidos demuestran que altas concentraciones de adenosina (100¿M) inhiben la diferenciación neuronal en cultivos de neuroesferas de la SVZ. Las células multipotentes de la SVZ expresan todos los receptores de adenosina (A1, A2a, A2b y A3); sin embargo el receptor A1 es el involucrado en la inhibición de la diferenciación neuronal como demostramos por PCR cuantitativa, Western Blot y en un ensayo de silenciamiento génico del receptor A1. Además, la activación del receptor A1 indujo una disminución de la expresión de genes relacionados con la neurogénesis como observamos en un análisis de expresión génica. El efecto inhibitorio de la activación del receptor A1 fue también confirmado en un modelo in vivo; de manera que observamos una reducción de la neurogénesis y un aumento de la astrogliogénesis en el bulbo olfatorio de ratas adultas tras la infusión intracerebroventricular del agonista del receptor A1 CPA. A su vez, el estudio de los mecanismos por los que la adenosina inhibe la neurogénesis y sostiene la astrogliogénesis demostraron la implicación de la IL10 y la activación de la ruta STAT3/Bmp2/Smad. Además, dado que la adenosina es liberada de forma masiva durante la isquemia cerebral, estudiamos el efecto del bloqueo del receptor A1 en un modelo de isquemia cerebral (oclusión transitoria de la arteria cerebral media). El antagonismo del receptor A1 produjo un aumento del número de nuevas neuronas (células positivas para DCX/BrdU o NeuN/BrdU) así como una reducción de nuevos astrocitos (células positivas para Thbs4/GFAP/BrdU) en la zona de penumbra isquémica. En definitiva, estos resultados sugieren que la activación del receptor A1 en isquemia puede ser un modulador de neurogénesis y astrogliogénesis.
138 p.
2016-06-16T00:00:00ZInteracción entre quinasas y moléculas apoptóticas en la muerte oligodendroglial excitotóxicaCanedo Antelo, Manuelhttp://hdl.handle.net/10810/190322022-12-28T12:32:28Z2016-05-27T00:00:00ZInteracción entre quinasas y moléculas apoptóticas en la muerte oligodendroglial excitotóxica
Canedo Antelo, Manuel
El fenómeno de excitotoxicidad glutamatérgica supone una de las causas subyacentes de multitud de enfermedades neurodegenerativas y afecta, entre otros tipos celulares, a los oligodendrocitos. Precisamente la vulnerabilidad oligodendroglial ante el citado fenómeno supone parte de la etiología de, entre otras, las enfermedades desmielinizantes. A este nivel se han puesto de manifiesto las principales características de los procesos de muerte oligodendroglial generados en condiciones excitotóxicas recreadas a través de la activación moderada de los receptores AMPA de oligodendrocitos. En este sentido, el presente trabajo de investigación, ha complementado y profundizado el conocimiento existente en relación a las moléculas y vías de señalización activadas bajo tales circunstancias. De esta manera, se ha establecido de forma novedosa la participación de la vía apoptótica extrínseca involucrando a moléculas como c-FLIP, Caspasa-8 y Bid. Además, se ha determinado la activación transcripcional y mitocondrial de p53, en íntima conexión con la activación de las MAPKs activadas por estrés (JNK y p38), estableciendo a ASK1 y CK2 como moléculas iniciales de la vía. Además se ha puesto de manifiesto la afectación de la vía PI3K/Akt/mTOR, mediante un mecanismo PTEN dependiente. Por último, se ha revelado la existencia del eje de señalización PKC¿/ERK/CREB con propiedades pro-supervivencia. En conjunto, los datos aportados complementan el conocimiento existente acerca del mecanismo apoptótico responsable de la muerte oligodendroglial excitotóxica
201 p.
2016-05-27T00:00:00ZRegulación de las GTPasas de la familia Ras y la viabilidad de neuronas dopaminérgicas en respuesta a la señalización purinérgicaUrzelai López de Aberásturi, Bakarnehttp://hdl.handle.net/10810/158722022-09-29T17:54:59Z2015-07-27T00:00:00ZRegulación de las GTPasas de la familia Ras y la viabilidad de neuronas dopaminérgicas en respuesta a la señalización purinérgica
Urzelai López de Aberásturi, Bakarne
El ATP es una molécula natural cuya liberación descontrolada puede elevar su concentración extracelular a rango mM y promover la estimulación de receptores purinérgicos. Se sabe que esta estimulación tiene efectos citotóxicos sobre las neuronas dopaminérgicas, aunque se desconocen los eventos moleculares a los que implica. La muerte de estas neuronas está íntimamente relacionada con la Enfermedad de Parkinson, ya que conlleva una disminución de la síntesis de dopamina y consecuente aparición de los síntomas típicos de esta enfermedad. Además de la función citotóxica, el ATP puede a través de los receptores purinérgicos inducir la activación de pequeñas GTPasas. Éstas, funcionan a modo de interruptores moleculares constituyendo un punto de encuentro en las complejas vías que controlan prácticamente la totalidad de procesos celulares, tanto fisiológicos como patológicos.Debido al papel de los receptores purinérgicos en la viabilidad de las neuronas dopaminérgicas, este proyecto se ha centrado en el estudio de los acontecimientos intracelulares que acompañan a la estimulación purinérgica en este tipo de neuronas, centrándose en la señalización y regulación de las pequeñas GTPasas de la superfamilia Ras.Este trabajo revela algunos de los protagonistas de la señalización celular mediada por receptores purinérgicos en neuronas dopaminérgicas, como son las GTPasas Ras y Rap1, el GEF regulador RasGRF, las cinasas PKC, PI3K y ERK1/2, y la tirosina fosfatasa PTPRß. Además, muestra que el calcio internalizado a través de dichos receptores, juega un importante papel como regulador de la actividad de Ras y ERK1/2 y la viabilidad neuronal.El estudio de las bases moleculares de estas neuronas es esencial para comprender los efectos funcionales de distintos estímulos, más aún, considerando la importancia de estas células en el desarrollo de la EP. En este sentido, nuestro trabajo aporta nuevas ideas entorno a dichas respuestas, identificando nuevas moléculas y vías de señalización intracelulares.
158 p.
2015-07-27T00:00:00ZArquitectura subcelular del sistema endocannabinoide en el núcleo ventromedial del hipotálamo de ratónReguero Acebal, Leirehttp://hdl.handle.net/10810/113212022-12-19T19:16:21Z2014-01-30T19:57:31ZArquitectura subcelular del sistema endocannabinoide en el núcleo ventromedial del hipotálamo de ratón
Reguero Acebal, Leire
El sistema endocannabinoide (eCB) es un complejo sistema endógeno de señalización, que participa en la modulación de la transmisión sináptica en múltiples circuitos cerebrales, incluyendo los que regulan el apetito, ingesta y balance energético. Por su parte, el hipotálamo, y en concreto el núcleo ventromedial (VMH), también participa en estas funciones. Esta Tesis Doctoral se ha centrado en el estudio de la localización subcelular de elementos clave del sistema eCB en el VMH de ratón, como el receptor CB1 y las enzimas de síntesis y degradación de los principales endocannabinoides (NAPE-PLD y FAAH para la anandamida y DAGL-¿ y MAGL para el 2-AG). Para ello, se han empleado ratones silvestres y mutantes condicionales junto con técnicas inmunocitoquímicas de alta resolución para microscopía electrónica.En resumen, el receptor CB1 en el VMH se distribuye en el 20% de las terminales sinápticas, sobre todo GABAérgicas, así como en terminales glutamatérgicas mayoritariamente de origen subcortical y, en menor medida, de origen cortical, mostrando una densidad similar en las terminales excitadoras e inhibidoras (0,4-0,5 partículas/¿m). Además, el 40% de los astrocitos del VMH son inmunopositivos para CB1. En lo que respecta a las enzimas, NAPE-PLD está presente a nivel presináptico y postsináptico pero con una distribución preferente en dendritas, al ser la mitad de ellas inmunopositivas; mientras que FAAH presenta una clara localización postsináptica siendo el 60% de las dendritas positivas. En cuanto al 2-AG, DAGL-¿ tiene una franca localización postsináptica en las membranas del 54% de las dendritas y del 44% de las espinas dendríticas; mientras que MAGL se distribuye en perfiles presinápticos y postsinápticos mayoritariamente en dendritas, al ser el 84% de ellas inmunopositivas. Por último, la densidad de marcado de FAAH en dendritas (8,6 partículas/¿m2) es mucho mayor que la de las otras enzimas (1,9-3,9 partículas/¿m2), y la densidad de todas ellas es más homogénea en las terminales sinápticas (3,0-3,7 partículas/¿m2). Estos resultados anatómicos contribuyen a un mejor entendimiento de la compleja modulación mediada por el sistema endocannabinoide de las funciones reguladas por el núcleo ventromedial del hipotálamo, incluyendo el control del apetito, la ingesta y el balance energético.
356 p. : il., graf. Nota: Contiene versión resumida en inglés p.237-256 con el título “Subcellular architecture of the endocannabinoid system in the mouse ventromedial
nucleus of the hypothalamus”
2014-01-30T19:57:31Z