Mutagenesi zuzendua Aspergillus nidulans onddoaren mutante akonidialak diseinatu eta sortzeko

Abstract

[EU]Mikroorganismoek garrantzi handia dute osasunarentzat, eta baita aktibitate ekonomikoarentzat ere. Batzuetatik garrantzia ekonomiko handiko konposatuak erauzten ditugu (antibiotikoak, inmunosupresoreak edo entzimak, esaterako). Bestetan, bakterio edo onddo espezie patogenoek gaixotasunak eragiten dituzte uzta ala pertsonengan. Infekzio hauek leku berrietara zabaltzeko harizpi itxurako onddoek konidia izeneko esporak milioika sortzen dituzte. GrAL honetan ikasleak konidiak sortzeko beharrezkoa den gene baten eremu desberdinetan mutagenesi zuzendua burutuko du PCR teknikaren bidez. Ondoren mutazio horiek daramatzaten andui errekonbinanteak sortu eta fenotipikoki karakterizatuko ditu, mutazio bakoitzak konidien produkzioan duen eragina aztertzeko. Bereganatutako teknikek, geneetan informazioa nola antolatzen den ulertu eta informazio hori nola manipulatu daitekeen ezagutzeko aukera emango diote ikasleari. Bestetik, etorkizunean edozein zelula bizian horrelako experimentoak diseinatu eta gauzatu ahal izateko oinarrizko ezagutza ere jasoko du.

[EN]The main aim of this Final Degree project has been the development of basic skills in stardard molecular biology techniques. The filamentous fungus Aspergillus nidulans and FlbE, a protein required for asexual development, have been used as models. Tryptophan in position 11 of FlbE has been replaced by an Alanine, and the effects of this replacement on the fungi’s development were studied, as well as the impact on subcellular localization and the interactions with other proteins. To proceed with the analysis, different molecular biology techniques were applied, such as PCR (Polymerase Chain Reaction), transformation, DNA extraction and detection, protein inmunodetection, protein-protein interaction assays and fluorescent microscopy. Overall, W11A substitution within FlbE causes an inhibition of its subcellular localization, interactions and the ability to induce development.